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夾心法

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

1. 將具有專一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

3. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進行鍵結

4. 洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結

5. 洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

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定性測定
　　　定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

在間接法和夾心法ELISA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。